SDS – PAGE onmenettely tutkijat käyttävät proteiinien erottamiseksi perusteella, miten ne läpi muuttaageelin . Geelit on valmistettupolymeeri nimeltään polyakryyliamidi . Kun teetpolyakryyliamidigeelin , aloitatkemikaalien seos : akryyliamidi , bisakryyliamidia , SDS jaPuskurointikemikaalin vakauttaapH . Lisäämällä persulfaatti yhdiste ja toinen kemikaali nimeltään TEMED aiheuttaaakryyliamidin muodostaa pitkiä ketjuja tai polymeroitua . Aloittamista
persulfaatti -ionin ammoniumpersulfaatti on vastaavat kahden sulfaatti-ioneja , joita yhdistää heikko happi-happi- sidoksen . Tämä sidos voi hajottaa tai rikkoa kahdella , jolloin saadaan sulfaatti radikaalit — erittäin reaktiivisia molekyylejä, joissaparittoman elektronin . Sulfaatti radikaali voi reagoida veden kanssa muodostamaan hydroksyyli- radikaalin , tai se voi reagoida akryyliamidimonomeeriliuoksesta aloittamaan polymerointireaktion . TEMED toimii katalysaattorina , joka nopeuttaanopeus, jolla Persulfate ioni muodostaa radikaaleja .
Chain Reaction
Kunhydroksyyli-tai sulfaatti radikaali on muodostunut , se hyökkääakryyliamidimonomeeri , ottamalla yksi elektronien kaksoissidoksen. Akryyliamidimonomeeri nytradikaaliparittoman elektronin , niin se menee hyökätä toiseen akryyliamidimonomeeri samalla tavalla . Tämä tapahtumasarja luonopeasti kasvava ketju akryyliamidimonomeerit yhdistää yhden joukkovelkakirjalainoja . Ketjureaktio päättyy vasta , kun kaksi radikaalit reagoivat keskenään .
Ristisilloitukseen
p Jos akryyliamidin olivat läsnä omasta , se ei muodosta paksu geeli tarvitsetSDS – PAGE . Polymeerien täytyy olla silloittunut muodostaen geelin jolla on oikeat ominaisuudet , ja se on silloin bisakryyliamidia tulee sisäänkaksoissidoksia bisakryyliamidia myös toimia kohteena radikaaleille reaktiossa , ja koska sillä on kaksi paikkaa, joissa se voi olla hyökkää radikaaleja, se on viime kädessä sisällytetään kaksikasvaa polymeerejä. Näin ollen polymeerit päätyä siltoja niiden välillä satunnaisissa kohdissa pitkin kunkin ketjun .
Huomioitavaa
polymerointireaktio on hyvin nopeaa , joten kun ” ve lisättyTEMED japersulfaatin , se tapahtuu hyvin nopeasti . Puhtautta reagenssien on tärkeää, koska epäpuhtaudet voivat vaikuttaa tuloksiin . Akryylihappo, esimerkiksi , voidaan lisätä polymeeriin ja luo ioninvaihto- sivustoja, jotka saattavat aiheuttaa paikallista pH: n vaihtelua oman geeli . Saatu geeli saattaa silti olla joitakin akryyliamidimonomeeri , ja akryyliamidin onhermomyrkky , joten aina noudattaa asianmukaisia varotoimenpiteitä, kun työskentelet SDS geelejä.