Glutationi tai GSH onproteiini löytyy sekä kasveja ja eläimiä . Se pyrkii auttamaan entsyymin reaktioitavieroitus ympäristömyrkyt . Lisäksi se helpottaa aminohappo kuljetus solujen sisällä ja auttaa säilyttämään proteiinin sulfhydryyli pelkistysreaktioita . GSH Pitoisuus pöytäkirjat käyttää GSH puskurit , standardit , alustan , entsyymit ja reagenssit . Seuraavaterityinen menettely on olennainentulosmäärityksessä. Entsymaattinen Kierrätys Menetelmä
entsymaattinen kierrätysmenetelmä , GSH , käyttää glutationireduktaasin määrällisesti GSH . Tämä protokolla on nimenomaan plasma, kudos-tai viljelty solu näytteitä. Lisääreagenssia DTNB ( 5 -5′- ditio – bis -2 -nitrobentsoehappo ) ja GSH . Sulfhydryyliryhmä GSH reagoireagenssin ja tuottaakeltainen acid kutsutaan 5 – tio – 2 – nitrobentsoehappoa ( TNB ) . Lisää glutationireduktaasin happo ja GSH seos kierrättää GSH ja tuottaa enemmän happoa . Tässä menettelyssä , määrä hapon tuotanto on verrannollinen kierrätys reaktio GSH ; siksi , mitataanabsorbanssiTNB hapon spektrofotometrilla . Absorbanssi tarjoaaarviotodellinen määrä GSH näytteessä .
Maksan solujen Glutathione Pitoisuus
Tämä protokolla analysoimäärä GSH ihmisen maksasyöpä ( maksasyöpä -solut) . Toteuttamaan tämän menettelyn , käytäkolorimetrinen menetelmä GSH päättäväisyyttä vähentää ja hapettaa GSH . Vähentämiseksi GSH käyttäen 5 -5′- ditiobis ( 2 – nitrobentsoehappo tai DTNB ) muodostamaan
värillinen tuote 2-nitro -5- tiobentsoehappo ja hapettunut glutationi ( GSSG ) . Käytä glutationireduktaasin vähentää GSSG muodostamiseksi GSH uudelleen . Jotta voidaan mitatamäärä GSHmaksan solujen , luenäytettä 415 absorbanssi kinetically mikrolevylukijalla .
Solukuoleman
Tässä protokolla , GSH käytetään havaitsemaan apoptoosia ( kuolema ) kautta mittaus lasku alennettua GSH . Konsentraation lasku solun GSH on osoitus solukuolemaa. Värjäänäytekennon ei- loisteputki thiolite vihreä . Thiolite vihreä kerääntyy sytosoliin (solu plasman ) ja mitokondrioita ( voimanpesä ) solun. Käytävirtaussytometriin 490/520 nanometriä visualisoida määrä GSH soluissa .
Yhteensä pitoisuus GSH eläinten ja kasvien Näytteet
Mittaa pitoisuus yhteensä GSH sekävähentää ja hapettuneen muodon eri eläinten ja kasvien näytteitä . Lisää yleisen tiolireagenssia , 5 -5 ’- ditiobis [2 – nitrobentsoehappo ] . Tiolireagenssin reagoi GSH muodostaa 412 nm kromoforiin , 5 – thionitrobenzoic happo ( TNB ) ja GS – TNB . Lisää glutationireduktaasi ja Beta – nikotiiniamidiadeniinidinukleotidifosfaatti ( NADPH ) vähentää GS- TNB . Glutathione julkaisee myöstoisen TMB molekyylin ja kierrättääGSH . Lisäksi , minkä tahansa hapettuneen GSH ( GSSG ) seoksessa läsnä fromed päässädisulfidi reaktio on myös alennettu GSH . Käytämikrolevylukijalla 405 nanometriä lukeaabsorbanssi tasolla ja osoittaayhteensä pitoisuus GSH .