Mahdollinen vedystä , tai pH , onmittahappamuutta tai emäksisyyttänestettä. On tärkeää monilla aloilla , kuten biologiaa , kemiaa ja ympäristötiede . PH: n on yksinkertainen useimmissa tilanteissa . Lakmuspaperilla voidaan lisätänestettä, ja muutos paperin värin tunnistaa , missä määrinneste on hapon tai emäksen kanssa . Tapauksissa, joissa testattavaa nestettä on solun sisällä , muita menetelmiä on oltava devised.Things tarvitset
2 ’ , 7’ – bis – ( 2 = karboksietyyli) -5 ( ja -6 ) – karboksifluoreseiini ( BCECF ) , tai muuta ainetta , joka on vaihtelevassa fluoresoivana eri pH-olosuhteissa
fluoresenssispektrofotometriä kaksinkertainen monokromaattoria tai samanlaisen välineen fluoresenssin mittaamiseksi
Sentrifugoidaan
Ennalta kalibrointikäyrille mittaamiseen korrelaatio solunsisäisen BCECF ja sytoplasmista pH
Näytä Muita Ohjeet
1
Jäähdytä kennon lämpötilan näytteen 41-50 celsiusta . Tämä mahdollistaa paremman absorption rate fluoresoivan materiaalin solut .
2
Aseta solu näytteenfluoresenssi aiheuttava aine , kuten BCECF . Tämä tehdään lisäämälläBCECF solun väliaineessa, sitten sekoitettu seos varovasti 2,5 tuntia . BCECF imeytyy läpäisevä kalvo soluja.
3
Erota solut väliaineesta ja kaikki imeytymättömän BCECF ajamalla näyte läpi sentrifugia . Laitasolut erilliseen astiaan .
4
Kuumennasolunäytteen 98,6 asteessa 30 minuuttia , lähentääedellytykset ihmiskehoon . Jos solut tutkittavana elävät tavallisesti joitakin muita ympäristölle kuin ihmisessä, säätää näytteen sopivaan lämpötilaan .
5
Kiihota solunäytevirta sekoittaen. Tämä auttaa lisäämään fluoresoivan aktiivisuutta .
6
Mittaa fluoresoiva intensiteetti solun näytteestä käyttäenspektrofotometriä . Saat parhaat tulokset käyttämällä eksitaatiovalon aallonpituuksilla 500-510 nanometriä . Näillä aallonpituuksilla , on olemassa suurempi leviäminen fluoresenssin voimakkuus , joten se on helpompi erottaa tuloksia . Fluoresenssin voimakkuus mitataan suhteessa loisteputki (RFU ) ,suhdekirkkauttaaineeninnoissaan, loisteputki valtion normaaliin , unexcited valtion . KorkeampiRFU ,kirkkaampiainetta , verrattuna normaaliin tilaan .
7
Vertaa spektrofotometrillä tulokset ennalta laadittu kalibrointikäyrien . Yleensä suurempi loisteputki sitä korkeampi pH näytteessä. Eksitaatioaallonpituudella 510 nm ,aine, jonka pH-arvo on 6,4 osoittaisiRFU on noin 20 , kun taasaine, jonka pH-arvo on 9,9 osoittaisiRFU noin 55 .