Yksi tavallisimmista laskemiseksiproteiinipitoisuus laboratoriossa on käyttääBradford -määritys . Bradford reagenssi onkolorimetristä reagenssi , joka vaihtaa väriä proteiinipitoisuus . Yhdistämällätunnettu standardi käyräBradford reagenssi , voit luodatoimenpide , jota vastaan voidaan laskeapitoisuuden tahansa proteiinia , kuten antibodies.Things tarvitset
puhdistettu vasta-aine tunnetulla puskurissa
Buffer Matching keskeyttäminenvasta-aineen
lyofilisoitu naudan seerumin albumiinia (BSA )
Microcentrifge putket
Laboratory kynän
Vortexer
Laboratoriomittakaavan
punnitus paperi
1 ml: n pipetillä
Bradford- reagenssia
monikuoppalevyä
Colorimetric -levynlukijaa
Microsoft Excel
Lab kirjan
Kynä
Näytä Enemmän Ohjeet
LuoStandard
1
Toimenpide 200 mg BSA punnituspaperille laboratoriokokoisella . Se laitetaan mikrosentrifugiputkeen . Lisätään 2 ml puskuriamikrosentrifugiputkeen , joka sisälsi200 mg BSA: ta. Levy tämä putki ”1”
2
Vortex putki 1, kunnes BSA on täysin liuennut .
3
Poista 500 uiBSA: ta puskurissa ja siirtoon sentoiseen putkeen . Otsikoi tämä putki ” 2. ” Lisää 500 ul pelkkää puskuria Tube 2.
4
Poista 200 ui BSA puskuria Tube 1 ja siirtää senuuteen putkeen . Otsikoi tämä putki ” 3. ” Lisää 800 ui pelkkää puskuria Tube 3.
5
Poista 100 ui BSA puskuria Tube 1 ja siirtää senuuteen putkeen . Otsikoi tämä putki ”4.” Lisää 900 ui pelkkää puskuria Tube 4.
6
Poista 10 ui BSA puskuria Tube 1 ja siirtää senuuteen putkeen . Otsikoi tämä putki ” 5. ” Lisää 990 ui pelkkää puskuria Tube 5. Putket 1 5 käsittävätarvostellaan standardi sarja . Ensimmäinen putki ontunnettu pitoisuus 100 mg /ml ; Toisen , 50 mg /ml ; Kolmas, 20 mg /ml , neljäs , 10 mg /ml ; ja viides , 1 mg /ml . Kukin putki sisältää noin 1 ml liuosta .
Luo vasta-aineen laimentamista
7
Lisää 5 0ul puhdistettua vasta-ainetta 95 0ul puskuria . Otsikoi tämä putki ” A.”
8
Lisää 10 ui puhdistettua vasta 990 ui puskuria . Otsikoi tämä putki ” B. ”
9
Lisää 2 ui puhdistettua vasta 998 ui puskuria . Otsikoi tämä putki ” C. ”
Asetalevy
10
Aseta 0,5 ml pelkkää puskuria ensimmäisessä kuoppiin kaksi sarakettakuopan levy, .
11
Jätä 0,5 ml sisällön putki 1 toisessa kuoppiinkahdessa ensimmäisessä sarakkeessakuopan levy, . Jatka alasluokiteltujen sarjojen kunneskahden ensimmäisen sarakkeen sisältävät 0,5 ml yhtä BSA standardiliuosta kustakin Putket 1-5 , mukaan luettuna kaivot pelkkää puskuria .
12
Lisää 0,5 ml Bradford reagenssia kuhunkin hyvin . Pyöritälevy sekoittaareagenssinproteiinipitoinen ratkaisuja , varo kaadasisältöä tahansa kuoppien . Odota 5 minuuttia .
13
Luelevyn protokollan mukaisesti erityisesti omaa levylukijaa aallonpituudella 595 nm .
Laske vasta-ainepitoisuus
14
Kopioiarvot luetaan-levynlukijaa Microsoft Exceliin .
15
Luokuvaajankaksi saraketta arvojen edustavanBSA standardin avullaChart Wizard Microsoft Excel .
16
Piirretäänpisteiden mitataanvasta- laimennosta Excel kuvaaja . Lue vastaavan proteiinin pitoisuus arvon mukaan y – akselilla vasta-aineen laimennuksen piste Excel- kuvaaja .
17
Riippuen siitä, et käyttäen saadut arvot Tube, B- tai C , kerrotaanarvo joko 20 , 40 tai 500 euroa . Saatu arvo onkeskittyminen oman puhdistettua vasta-ainetta .