replikointi kromosomeja , lähetti-RNA jalostus , käännös proteiineja , ja kriittiset päätökset varhaisessa kehitysvaiheessa riippuuvuorovaikutusta DNA, RNA ja proteiinit . Nämä vuorovaikutukset ovatbiologisten perusprosessien geenien ja proteiinien synteesiä . Tutkijat käyttävät usein Saccharomyces cerevisiae , saman lajin hiivaa käytetään leivonnassa ja oluen, tutkia geenejä , jotka koodaavat tiettyjen proteiinien ja analysoida vuorovaikutukset proteiinien ja muiden molekyylien kanssa. Hiivan kolme – hybridi -järjestelmä on yksi kolmesta variantteja hiivan kaksi – hybridi -järjestelmä , jota käytetään tutkimaan näitä vuorovaikutuksia . Two- Hybrid System
two hybrid- menetelmää käytetään havaitsemaan proteiini-proteiini- vuorovaikutusten etsimälläilmentymisenreportteri -geenin . Monet proteiineilla on ainakin kaksi domeenia , tai erillisiä rakenteellisia ja toiminnallisia yksiköitä. GAL4- , proteiini, jota esiintyy Saccharomyces cerevisiae , on DNA: ta sitovan domeenin ( DBD ) jaaktivaatiodomeeni (AD ) . Tässä menetelmässä yksi hybridi- proteiini on fuusioituDBD jatoinenAD . Ei reportteri geeni ilmentyy fuusioimalla vain yksihybridejä. Koska GAL4- reportteri -geeni ilmentyy vain silloin, kun molemmat hybridit ovat läsnä , proteiini – proteiini-vuorovaikutuksen on osoitettu .
Three- Hybrid System
kolme – hybridi menetelmä tunnistaa reportteri -geenin havaitsemiseksi vuorovaikutusta proteiinin RNA: n kanssa . Ensimmäinen hybridi -proteiini koostuuDBD fuusioitunut suoraanRNA: n sitova alue . Toinen koostuuAD GAL4- transkriptiotekijän liittyyRNA: n sitovaa proteiinia . RNA: ta sitovat domeenit ovat vuorovaikutuksessahybridi -molekyylin RNA, joka sitoo kahta hybridi -proteiinien kompleksin muodostamiseksi . Kompleksin muodostuminen laukaisee ilmentyminen GAL4: n reportteri -geenin . Koska reportteri -geeni on päällä vain muodostamalla kolmen hybridin monimutkainen, sen läsnäolo osoittaa, että vuorovaikutus RNA: n ja proteiinin .
One – Hybrid System
yksi -hybrid -menetelmää käytetään havaitsemaan vuorovaikutus -proteiinin DNA: n kanssa . One – hybridi Järjestelmäsuojausyhden proteiinin , joka yhdistääAD suoraanDBD . Sen sijaan, että tunnistetaanreportteri -geeniä, tämä menetelmä näyttää tiettyä proteiinia, joka on tunnustettava,kohde- DNA: n sekvenssi . Läsnäolospesifisen proteiinin osoittaa vuorovaikutuksen proteiinin DNA: n kanssa .
One – Two Hybrid System
yksi-kaksi hybrid -menetelmää käytetään tutkia proteiini – proteiini-ja proteiini-DNA- vuorovaikutusten samanaikaisesti . Käyttäen äskettäin kehitetty hiivakantoja , tämä menetelmä käyttääGAL4 reportterigeeni tunnistaa proteiini-proteiini vuorovaikutusten jap53 yksimielisyys tunnistaa proteiini-DNA vuorovaikutusta . Menetelmä odotetaan merkittävästi lisätätarkkuutta koetuloksista, koska ne vähentävät vääriä positiivisia Suorituskyky muissa hybridijärjestelmät .